Detecci n de Metabolitos de Drogas de Abuso por Cromatograf a de Gasses acoplado an espectrometr a de masas .


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Ernesto Bernal Morales P.G.J. del Estado de México Detección de Metabolitos de Drogas de Abuso por Cromatografía de Gasses acoplado an espectrometría de masas

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Definición de Droga de Abuso "Bajo el nombre genérico de drogas de abuso se pueden incluir una larguísima lista de sustancias químicas de diverso origen que pueden ser susceptibles de consumo con fines no terapéuticos" Gisbert Calabuig "Medicina Legal y Toxiologia Ed. Masson Barcelona 2001

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Clasificación de Drogas de Abuso Alcohol etílico Opiáceos Inhalantes Cocaína Anfetaminas y sustancias afines Otros estimulantes (Café, Khat, and so on.) Derivados de la Cannabis Sativa Alucinógenos (PCP, LSD, and so forth.) Hipnóticos y ansiolíticos Tabaco

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Efectos Farmacológicos Compuestos psicoactivos Estimulantes (cocaína, anfetaminas) Depresores (liquor etílico) Narcóticos (opiáceos) Alucinógenos ( Cannabis sativa, PCP, LSD)

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Áreas de Aplicación de la toxicología forense y el Análisis de Drogas Medico Legal Postmortem – Causa y modo de la muerte Identificar personas que manejan bajo la influencia de drogas (DUI y DUID) Correccionales, fianza, and so on. Laboral Programas públicos y privados para la detección de drogas en empleados Deporte Juegos Olímpicos, Tour de France, and so on

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Funciones de la Toxicología Forense Identificación de un agente lesivo Sustancias que produzcan una alteración psíquica pasajera o permanente Intoxicación como circunstancia calificadora de un delito Intoxicación como delito Intoxicación como estado peligroso

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Investigación Toxicológica Es el conjunto de procesos analíticos que tienen por objeto el aislamiento, identificación y determinación cualitativa o cuantitativa de los tóxicos tanto en vivo como en el cadáver, con el blade de permitir el diagnostico de intoxicación y el esclarecimiento de los hechos.

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Recomendaciones pata la Investigación Toxicológica Forense ( Orfila ) Todo los analistas deben de tener experiencia en Toxicología. El analista debe de recibir la historia completa del caso con toda la información disponible. Todas las evidencias correctamente etiquetadas y selladas en recipiente limpios deben ser remitidas y analizadas. Todas las pruebas analíticas deben ser aplicadas. Los reactivos tendrán que ser puros y tendrán que correrse siempre blancos. El análisis debe de hacerse por duplicado.

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Pasos de la Investigación Toxicológica Información Toma de Muestra Procesamiento de la muestra Aislamiento, Concentración Hidrólisis, digestión, desproteinizacion, and so forth. Diferenciación y detección Identificación Comparación datos encontrados con bases de datos de referencia Cuantificación Interpretación de los resultados

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INFORMACIÓN QUE DEBE SER ENVIADA AL ANALISTA FORENSE Nombre, edad, sexo, peso, nacionalidad, ocupación Historia Clínica (Drogas prescritas, adicciones, sospechas) ¿Cuando fue vista por ultima vez la víctima?¿Donde fue encontrada? Si estaba enferma ¿Desde cuando? Datos sobre tratamiento medico, análisis previos hechos Síntomas Declaración de testigo de los hechos y Testigos de identidad. Descripción de la escena del crimen Necropsia "Clarke\'s Analysis of Drugs and Poisons", ed. Air conditioning Moffat, MD Osselton, B. Widdop Pharmaceutical Press London (2004).

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Clasificación de Tóxicos "Clarke\'s Analysis of Drugs and Poisons", ed. Air conditioning Moffat, MD Osselton, B. Widdop Pharmaceutical Press London (2004).

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Análisis De Drogas En Muestras Biológicas El análisis es posible en todas las muestras biológicas Diferentes muestras biológicas dan diferente información Interrelación entre las muestras Ventanas de Detección

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Especímenes para búsqueda de drogas Vivos Sangre* Orina Fluido Oral Pelo Sudor Aliento Muertos Sangre Orina Humor Vítreo Tejidos

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Ventajas Y Desventajas De Diferentes Muestras

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Dificultad Del Análisis Químico De Especimenes Biológicos

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Aproximaciones al análisis Toxicológico Enfocado An una droga en specific Limitado An una familia de Drogas Comprensivo Una gran cantidad de drogas

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Métodos para el Análisis de Drogas de Abuso Presuntivas Inmunoensayos enzimaticos (EIA) Inmunoensayo por fluorescencia polarizada (FPIA) Radioinmunoanálisis (RIA) Cromatografía de capa fina (CCF) Confirmación Cromatografía de líquidos – espectrometria de masas (CL-EM) Cromatografía de gasses - Espectrometría de masas (CG-EM) Electroforesis Capilar-Espectrometria de masas (EC-EM)

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Métodos presuntivos Análisis inicial " Screening " Identificar muestras negativas Selectivos a familias de drogas Sensibles Rápidos Barato Negativo es negativo Positivo necesita confirmarse Inmunoensayos Cromatografía en capa fina

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Inmunoensayos Radioinmunoensayo (RIA) Inmunoensayo enzimático (EMIT, CEDIA) Inmunoensayo por Polarización de la fluorescencia (FPIA) Interacción cinética de microparticulas en solución (KIMS) Ensayo por enzima unida an inmunoabsorbente (ELISA)

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Inmunoensayos – Principio -

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Características generales de los inmunoensayos

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Análisis Toxicológico – Pruebas Presuntivas - Equipo Viva Twin P.G.J.E.M.

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PROCESO DE LA MUESTRA PARA INMUNOENSAYOS Orina Centrifugar la muestra Sangre Desproteinizacion Disolventes Metanol Acetona Cloroformo Acetonitrilo Acido sulfosalicilico N,N Dimetilformamida Humor vítreo Centrifugación Dilución

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Análisis Toxicológico - Prueba Confirmativa - Un segundo análisis, empleando generalmente una técnica con un principio químico diferente a la prueba presuntiva. Técnica cromatografica acoplada an una espectrometría CG/EM, CL/EM Identifica sustancias Sensibilidad Generalmente, cuantitativa Mas confiable (Validez Legal)

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Cromatografía Definición Es un método de separación basado en la diferente distribución de los componentes de una muestra entre una fase móvil y una fase estacionaria. Adsorción: basado en diferencias en la afinidad entre una fase móvil y la fase estacionaria. Partición: Diferencias en la solubilidad entre una fase liquida estacionaria y una fase móvil líquida o gaseosa. "Standards on Forensic Toxicology" Barry Levine AACC Press (2004)

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Cromatografía – Historia - 1903 - 1906 Tswett 1929 Lederer 1938 - 1939 Ismailov y Shraiber (CCF) 1941 – 1952 Martin, Synge and James (CG) 1950 M.J.E. Golay 1960 CL 1960 CG-EM

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Técnicas de Separación y Sistemas de Fases Extracción líquido (ELL) L/L Extracción en fase sólida (EFS) L/S Cromatografía en capa fina L/S Cromatografía en columna L/S Cromatografía de Líquidos L/L Cromatografía de Gases L/L y L/S

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Cromatografo de gasses Sustancias térmicamente estables y volátiles

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Que proporciona la cromatografía de gasses? SEPARACION Diferencia analitos entre ellos y entre los componentes de la matriz PARAMETRO DE RETENCION Determinado por las diferencias de afinidad del analito por la fase estacionaria y la fase móvil Parámetro cualitativo RESPUESTA DEL DETECTOR Señales del indicator child proporcionales a la concentración de la sustancia Parámetro cuantitativo

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Fotométrico de llama Un filtro óptico selecciona longitudes de onda específicas de compuestos de P o S PMT O 2 H 2 Termoiónico NP Los compuestos de N o P aumentan la corriente en el plasma de la sal metálica vaporizada H 2 Detector s electivo de m asas La muestra ionizada es medida en un analizador de masas Ion Analizador Fuente EM Detectores CG Conductividad t érmica El standard de filamentos se calienta cuando la muestra diluye el gas portador REF Ionización de llama La combustión deliver partículas cargadas que el colector convierte en una corriente Aire H 2 Captura electrónica La pérdida de electrones lentos por absorción de la muestra disminuye la corriente en la celda

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Comparación entre detectores de GC TCD FID ECD NPD(N) NPD(P) FPD(S) MSD (SCAN) (SIM) 10 - 3 mg 10 - 15 fg 10 - 12 pg 10 - 9 ng 10 - 6 ug 1 ng en 1 ul l íquido (sg = 1) es concentración 1 ppm El locator selectivo de masas es: Específico y all inclusive

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Detección multidimensional Espectrometría de masas Analitos child transformados en iones cargados o fragmentos los cuales child subsecuentemente separados de acuerdo a su radio masa/carga y sus abundancias child medidas Proporciona información acerca de la estructura atomic del analito Identificación de los analitos (comparación con bases de datos)

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Proceso

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Abundancia Espectro medio de dodecano por EVALDEMO.D 57 100 + <- - [C H ] (Pico base) 4 9 90 80 70 71 43 + 60 <- - [C H ] 11 5 50 85 40 + <- - [C H ] 6 30 13 + . M (Precursor) 20 55 29 98 113 10 170 128 141 159 m/z-> 60 20 40 80 100 120 140 160 180 Un espectro de masas típico Ion sub-atomic (particle antecedent): pérdida de un electrón Pico base: particle más abundante en el espectro Dodecano: C12H26

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Preparación de la muestra Disgregar la materia orgánica (sólidas) Hidrólisis (proteína, glucuronidos) Extracción con una fase orgánica

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Matrices Líquidas Extracción líquido-líquido Extracción en fase sólida (discos, cartuchos) Microextracción en fase sólida Muestras sólidas Extracción líquido-sólida (soxhlet, bligh & Dyer) Dispersión de la matriz en fase sólida (MSPD) Extracción de Fluidos supercrítico (SFE) Extracción acelerada de disolvente (ASE) Extracción asistida por microondas (MAE ) Extracción de Drogas de muestras biológicas

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Errores en el analisis de compuestos organicos

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Metabolismo

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Factores que determina

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