Detection of pathogenic microorganisms in bathing waters

1. Vskyt patogennch mikroorganism (S. aureus, P. aeruginosa ) v koupacch vodch a jejich korelace s indiktory feklnho zneitn semin Novinky v metodch mikrobiologickch a biologickch analz povrchovch vod ke koupn 26.4.2012, Praha RNDr. Jaroslav aek Sttn zdravotn stav

2. Poty indiktorovch mikroorganism a procento vskytu patogen (Campylobacter, Giardia, Cryptosporidium, Noroviry) v povrchov vod (eky, jezera) H rman et al, 2004

3. asociace stafylokokovch konch infekc a plavn (Charoenca, Fujioka, 1995) Universita Bangkok + Universita Honolulu stafylokokov kon infekce & rekreace v pobench vodch (kanoisti) t vztah k vodn expozici ( 4x vce proti kontroln skupin)

4. kontaminace psku a vody S. aureus a dal kontaminanty Papadakis, Mavridou et al.(1997) voda i psek kontaminovny S. aureus vce v lt ne v zim vznamn korelace S. aureus ve vod & poet koupajcch se podobn plat i u kvasinek (Candida spp., Torulopsis, Trichosporum, Pichia, Cryptococcus, Pitirosporum)

5. Staphylococcus aureus S . aureus se nepodailo prokzat ve sledovanch lok a litch v objemu 10 ml (vy objem nebylo mono s ohledem na doprovodnou mikroflru u kontaminovanjch vod analyzovat) Prokzn byl jen po skonen koupac sezn (31.10.2011) na profilech : Orlk-Radava - 10 ml (6 ktj) Berounka-ernoice - 1 ml (22 ktj)

6. stanoven koagulzopozitivnch stafylokok metodou dle SN EN ISO 6888-1 se stanov: S. aureus (pat. pro lovka) S. intermedius (pat. pro lovka) nkter kmeny S. hyicus (ne u lovka)

7. konfirmace S. aureus: K onfirmace suspektnch koloni : - plasmakoagulzovm testem j e dosti subjektivn (hodnocen koagultu), proto bylo potvrzen doplnno o dal alternativy test s hyaluronidsou - latexovm testem ( Latex Pastorex Stah+, Bio-Rad), ty vak byly negativn i v datu 31.10.

8. koagulzov test H usler, 1994

9. STAFYLO PK i muna nvod vrobce : Hodnocen : hodnot se rychlost a kvalita koagultu. Za pozitivn reakci se povauje vytvoen koagultu do 6 hod ., opodn pozitivn reakce do 24 hod .

10. test na hyaluronidzu princip : pomoc testu dekapsulace mukoznho kmene Streptococcus equi subsp. zooepidemicus se produkce hyaluronidzy proke pouze u S. aureus a S. hyicus

13. Pseudomonas aeruginosa / Cabelli a Fraser in Seyfried and Cook / V koupalitch ve voln prod se P. aeruginosa nesleduje jsou znmy ppady infekce vnjho zvukovodu z koupn v jezerech (Hoej jezero a jin jezera v tto oblasti, Kanada) se zvenmi poty P. aeruginosa ve vod i v sedimentech ( ve vod 122 ktj/100 ml s rozptm hodnot 2-1.600 ktj/100 ml, v sedimentech 143 ktj/100g s rozptm 2-920 ktj/100 g). Hodnoty feklnch koliform v sedimentu inily 1600 - >2400/100g sedimentu.

14. Pseudomonas aeruginosa ( 2) Poty P. aeruginosa ve voln vod mohou vz rst i dov v dob vrcholu koupacch aktivit od 11 5 hod ( Cabelli ) co je dno resuspendac sedimentu , kter slou jako reservor agens . podobn Fraser uvd zmny denzit P. aeruginosa v sedimentu a voln vod v dsledku koupacch aktivit osob . Rno pi potu 23 osob P. aeruginosa nebyla ve vod ve 100 ml prokzna, v sedimentu v denzit 612 ktj/100 g , odpoledn pi potech 135 koupajcch se poty P. aeruginosa ve vod dosh l y 42 ktj/100 ml a v sedimentu jen 12/100g .

15. Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa byla vyetovna jednak dle SN EN ISO 16266 v objemu max. 10 ml pro eky (Otava-Vojnkov, Berounka- ernoice) v objemu 100 ml (pehrada Orlk- Radava, rybnk eberk) a dle metodou Pseudalert, Idexx ve 100 ml.

16. Vskyt Pseudomonas aeruginosa na lokalitch Otava- Vojnkov, Orlk-Radava, Berounka-ernoice, rybnk Seberk. metoda SN EN ISO 16266 CN agar

17. . Denzity na ekch ve sledovanch profilech jsou znan (dov stovky ktj/100ml ), na rybnku (eberk) a pehrad (Orlk- Radava) dov ni . Vzhledem k tomu, e metoda dle SN EN ISO 16266 aplikovan na povrchov vody je velmi pracn a dky malch vyetenm objemm (v dsledku lokalit s vysokou doprovodnou mikroflrou eky) i nepesn, zkoueli jsme metodu, kter by mohla vyetovn velice ulehit. Jedn se o metodu na principu MPN s fluorescentn koncovkou Pseudalert , Idexx s deklarovanou vysokou mez detekce (1 ktj/100 ml v pitn i balen vod). Jejich srovnn vak zatm pineslo jen znan diference ve vech porovnvanch parametrech prmr, medin, P90 viz nsledujc tabulka a graf.

18. srovnn medody na CN agaru & Pseudalert, Idexx

19. srovnn metody na CN agaru a Pseudalert, Idexx I kdy je deklarovno vrobcem, e test Pseudalert detekuje P. aeruginosu ji za ptomnosti jedin kolonie ve 100 ml vzorku vody do 24 hod. v balen vod a vod z bazn a lzn, v povrchov vod i v relativn ist vod v pehrad Orlk toto neplat . V ad dat bylo zjitno, e Pseudalert detekuje 0 ktj ve 100 ml vyeten vody, zatmco CN agar vykazuje zchyty ji v 1 ml (Orlk, eberk), jindy vede k neadekvtnm hodnotm, v ppad Pseudalertu i dov podhodnocen (vtinou eky). Vjimen dv Pseudalert falen pozitivn hodnoty (eberk) >2.419,2 / 100 ml zatmco CN agar jen 23- 100/100 ml, co zatm nen objasnno ??? .

20. . .

21. Vsledky z roku 2011 fekln indiktory byly zjitny rozdly konench vsledk pi okovn mench objem vzork vodu (1ml & 10 ml) a nslednm pepotu na vy objem (obvykle 100 ml) u silnji zneitnch vod! - dvod (vce prostoru pro clov mikroorg., mn doprovodn mikroflry na jedn. prostoru, mn inhibice) rozdly pi okovn vtch objem (100 ml) proti menmu (10 ml) u istch vod! - dvod (u istch vod ni vyeten objem nepostihne dn kvantitativn pomry)

22. enterokoky - okovn 100 ml a 10 ml pepoet na 100 ml ist vody pehrada Orlk, rybnk eberk

23. enterokoky - okovn 100 ml a 10 ml pepoet na 100 ml . okovno: 100 ml 10 ml zle na denzit clovch mikrob (zde objem 10 ml dn nezachyt kvantitativn pomry)

24. enterokoky - okovn 10 ml a 1 ml pepoet na 100 ml . kontaminovanj vody eky

25. enterokoky - okovn 10 ml a 1 ml pepoet na 100 ml .

26. Vsledky 2011 mdi a od rznch vrobc dv aj rzn vsledky (i kdy odpovdaj receptue dle pslun normy )

27. mdia od rznch vrobc Merck & HiMedia . vrobce: Merck HiMedia

28. mdia od rznch vrobc

29. pomr suspektnch a konfirmovanch koloni

30. pomr suspektnch a konfirmovanch koloni

31. Vsledky 2011 pouit rznch alternativnch metod dv rzn vsledky (i kdy tyto odpovdaj referennm metodm, stanovenm pslunmi pedpisy)

32. .

33. .

34. .

35. Vsledky 2011 diference mezi metodami bakt. pdami (rzn vrobci) rzn velikost okovanho objemu a nsledn pepoty vsledk na jin objem zjitn na zklad statistickch parametr ( arit. prmr, medin, P90) nebyly sice statisticky vznamn ( = 0,05 i = 0,0 1 ), ale pedstavovaly znan procentuln rozdly , co by mohlo mti vznam p ro posuzovn a klasifikaci jakosti vody

36. Vsledky 2011 V rmci projektu bylo sledovno i rzn sloen CCA mdia (uvaovan nhrada pi revizi ISO 9308-1 ) : nejvhodnj se jev varianta CCA (36C-ATB) jak k mdiu Rapid EC2,Bio-Rad k metod Colilert 18, Idexx MUG/EC,Bio-Rad oproti variantm CCA (36C+ATB ) i CCA ( 44C ATB) podobn zvry vykzal i pedvalidan test ISO : CCA- ATB pro pitn vody CCA + ATB pro povrchov

37. Vsledky 2011 Byly sledovny i rzn potvrzovac /konfirman testy pi stanoven S. aureus : Staphylo PK test test s prkazem hyaluronidzy latexov test Latex Pastorex TM Staph+. Vzhledem k minimlnmu vskytu S. aureus ve sledovanch koupacch vodch zvry nechme na nsledujc seznu 31.10.2011 - pozitivn SPK, Imuna (koagulum hodnoceno 3+ viz H usler 95 ) testy s hyaluronidzou i latexov test (Latex Pastorex) jsou negativn !!!

38. Vsledky 2011 stanoven P. aeruginosa : CN agar dle SN EN ISO 16266 a Pseudalert, Idexx (nen uren pro povrchov vody) spolu nekoresponduj ani kvantitativn ani mez detekce

39. Zpracovn s podporou projektu TAR TA 01020675